产品描述

通常T7 转导的体外转录(IVT)合成过程中会产生引发细胞免疫反应的副产物，包括双链RNA(dsRNA)，这已被证明成为免疫通路的主要触发因素，影响最终药品的安全性和有效性。

本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫法(夹心ELISA)检测体外转录体系或合成的mRNA原液中dsRNA的含量。用捕获抗体M2(鼠LgG2a单抗)包被微孔板，形成固相抗体，向固相抗体微孔板中加入dsRNA校准品和待测样品，然后加入检测抗体M5(纯化鼠LgM单抗)，最后加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，形成“包被抗体-抗原-酶标检测抗体”复合物，经过洗涤后加入显色液显色，终止反应后使用酶标仪检测吸光值，吸光值与样品中dsRNA的量呈正相关。

产品优势

原料可控：自主开发抗体，标准品采用修饰合成500bp dsRNA，原料可溯源可控，稳定性好，质量控制佳，且满足大规模生产需求

产品性能优异：分析灵敏度高-LOD＜10 pg/ml，LOQ=47 pg/ml；精密度好-CV<15%；准确度佳-加标回收准确度满足80-120%；特异性好-只特异性识别dsRNA，其他形式核酸或IVT工具酶对其无干扰

支撑申报：试剂盒方法学遵循药典及生物样品分析方法验证M10进行了完整验证。可提供完整验证报告，满足申报过程中对分析方法验证相关要求

操作便捷：使用预包被酶标板(已包被M2单克隆抗体)，可直接加样检测，使用更方便，结果更稳定

检测原理

信使RNA (mRNA)是将DNA中编码的遗传信息传递给细胞的蛋白质合成机制的中间分子。由于现阶段mRNA技术的进步，包括对mRNA的修饰和对递送载体的改进，mRNA正在被探索作为各种治疗方法，例如，免疫肿瘤靶点药物、疫苗、蛋白质和基因编辑药物。该方法的简单性(即在体外合成类似于内源性mRNA并编码目的蛋白质的mRNA，然后在体外或体内递送和表达)使其具有广泛的适用性。

将体外转录的RNA用作预防或治疗需要大量具有低免疫原性的功能性mRNA，合成这些体外转录mRNA主要是使用T7噬菌体RNA聚合酶(T7 RNAP)。T7 RNAP从包含特异性启动子的DNA模板中高效地转录RNA，但之前的研究已经确定了体外合成过程中某些会引发细胞免疫反应的副产物的存在，包括双链RNA (dsRNA)，这已被证明成为免疫通路的主要触发因素。

本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫法(夹心ELISA)检测体外转录体系或合成的mRNA原液中dsRNA的含量。用捕获抗体包被微孔板，形成固相抗体，向固相抗体微孔板中加入dsRNA校准品和待测样品，然后加入检测抗体，最后加入辣根过氧化物酶标记的酶标试剂，形成“包被抗体-抗原-酶标检测抗体”复合物，经过洗涤后加入显色液显色，显色液在HRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下最终转换成黄色，颜色的深浅与样品中dsRNA的量呈正相关。

产品组分

储存条件

1. 2 ~ 8℃保存，避免强光直射。冰袋运输。

2. 包被条拆封使用后，应将剩余包被条密封，在2 ~ 8℃储存，在有效期内使用。

3. 试剂盒其他组分使用后要及时放回到2 ~ 8℃条件，在有效期内使用。

4. 产品批号及失效日期：见产品外包装标签。

Q1. 标准品是根据特定模板设计的吗？不同的模板是否能够通用？

A1. 是随机模板合成的500 bp dsRNA；模板不同是可以通用的，因为抗体结合的是dsRNA的骨架，与序列无关。

Q2. 标准品是修饰的吗？能否单独购买？

A2. 是的，试剂中配套的标准品是N1-Me-Pseudo UTP修饰。

我们有配套三种不同修饰的标准品可以单独购买（DD3413-C1、DD3436、DD3437），建议使用与样品对应修饰的标准品。

Q3. dsRNA残留检测试剂盒中抗体是包被好的吗？

A3. dsRNA定量检测试剂盒是预包被好板子的，可以省去您包板的操作。

Q4. 试剂盒检测对dsRNA的长度有要求吗？可以检测多长的dsRNA?

A4.  可以识别长度大于40 bp的dsRNA，没有上限，已验证范围可达 4000 bp。

Q5.  绘制标准曲线时需要代入空白吗？

A5. 参考药典的方法，绘制标曲一般不带空白点。

Q6. 试剂盒需要严格在无RNase酶环境下操作吗？

A6. 一般只要不是人为引入大量RNase酶，或是有严重RNase酶污染的环境下就不会影响检测。

Q7. 封板膜能重复使用吗？

A7. 不可以，实验中4次孵育过程中都需要用到封板膜，正好对应4张封板膜，重复利用会污染样品；如您需要分板操作，可以适当剪裁封板膜，一定避免重复使用。

Q8. 一般样本稀释多少倍？

A8. 不同序列/反应条件原液中dsRNA含量不固定，所以没有一个固定的稀释倍数。一般按dsRNA在mRNA样本的浓度占比来定稀释范围，建议梯度稀释摸索一下，从10倍开始稀释。

Q9. 显色步骤需要避光吗？

A9. 常规室内照明条件下对检测影响有限，建议在显色孵育阶段避免强烈的光源直接照射反应体系，无需刻意避光。

Q10. 终止后一定要马上检测吗?

A10. 加完终止液后1小时内检测对结果影响不大，但是不建议更长时间，时间久了颜色会发生变化。

Q11. 样本未稀释和稀释后回算差异较大。

A11. 样本未稀释可能是由于基质效应，因此必须对样品进行稀释。我们一般建议至少稀释5倍以上，一是为了降低基质效应，二是样品稀释液可以让抗原抗体更好的亲和，保证检测结果的准确性。

Q12. 检测值低于标准曲线范围，是什么原因，应该怎么解决？

A12. 这种情况需要设置实验对照组来排查，建议在实验组别中添加阳性对照孔。如标准曲线及阳性样品均正常，检查待测样品是否稀释倍数过高，可以降低稀释倍数；如降低稀释倍数仍检测不出，则表明待测样品该指标低于检测下限，报告为≤检测下限即可。